《法医秦明2：清道夫》红衣女子是韩天峰。韩天峰由李逸男扮演，拿手笔记鉴别的心理学老师，因备受家庭的干扰，成年后心态慢慢产生变化，以几近偏执的形式匡扶自个心里所了解的“正义”。在“清道夫”身份完全暴露后。他企图与秦明再度过招，将“清道夫”理念在秦明的身上得到续延。

秦明由刘冬沁扮演，龙番市警局法医，步兵的学生。在应对受害人尸体所展现结果的疑问时，利用理性的分析，立在凶手的视角，顺利解决“清道夫”为公开挑衅他所留下来的摩斯密码“Hi”。

林涛由刘畅扮演，刑警队的大队长。他与秦明一同去逝者或犯罪嫌疑人家中找案件线索时，询问大部分全是由林涛承担，秦明会适度补充但并不会喧宾夺主。实行追捕任务时，也通常全是林涛承担。在搜集尸体有关信息、推断凶手犯案动机这种方面，则由秦明和陈诗羽承担。

陈诗羽由于莎莎扮演，龙番市警局新生代法医，秦明的助手。她的专业能力尽管比不上秦明经验丰富，但总是能给出许多稀奇的建议，激发秦明的灵感。她心理承受力比较脆弱，碰到灭门案会痛哭忧伤，乃至一醉解千愁。

步兵由王辉扮演，在龙番市政法学院任职专家教授，是一位笔迹专家，当他知道自个视作精神寄托的闺女步心遥被别人撞死，杀人凶手反倒逍遥法外，乃至变成大企业家和慈善家，如此的现实情况完全击溃了步兵的心理防线。